本发明公开了一种用于原始生殖细胞靶向突变的转基因载体及制备方法和用途。将本发明提供的载体pTol2(UAS : Cas9)导入单细胞期斑马鱼胚胎,获得的Tg(UAS : Cas9)品系与Tg(kop : KalTA4品系)雌鱼杂交后,获得的杂交胚胎能够在斑马鱼原始生殖细胞中高效、特异、持续表达Cas9基因。在制备突变品系时,以Tg(UAS : Cas9)雄鱼与Tg(kop : KalTA4)雌鱼杂交胚胎作为受体胚胎,直接注射靶向基因的gRNA后,能够有效减少体细胞突变,从而增加注射的P0代胚胎的成活率,同时P0代成鱼能够有效的传递突变,具有广泛应用前景。
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