本发明提供了一种DNA构建物,所述DNA构建物中包括前缀与后缀,并且所述DNA构建物含有结构Ta‑C‑Tb,式中,Ta为前缀,含有酶切割位点的核酸序列;C为待拼接的核酸序列;Tb为后缀,含有不同于前缀的酶切割位点的核酸序列;其中,所述前缀和后缀包含的酶切位点(T2与T3)经酶切割后产生同尾序列。本发明还提供了上述DNA构建物的应用和使用该DNA构建物的一种DNA体外拼接方法。使用本发明的构建物和方法能够对DNA进行工程化、标准化、模块化的改造或组装。
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