本发明公开了利用基因组编辑技术构建鳞翅目昆虫雌性不育品系的方法。该方法包括:1)构建Esp基因敲除核酸构建物,其包括从5’端到3’端的以下可操作性连接的元件:U6启动子,第一Esp基因靶点和polyA;U6启动子,第二Esp基因靶点和polyA;2)将所述构建物和可表达Piggybac转座酶的PHA3PIG质粒共转鳞翅目新鲜昆虫卵,得G0代,自交得G1代;和,3)将所述G1代与表达Cas9蛋白的转基因鳞翅目昆虫交配得G2代,即得。本发明利用基于piggyBac转座子的CRISPR/Cas9技术成功构建了在不影响正常交配行为的前提下雌性不育的鳞翅目昆虫,在鳞翅目害虫通过雌性不育技术进行防治方面具有重要的价值。
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